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雙螢光素酶

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雙螢光素酶報告基因

貨號:GC1032

品牌:Servicebio

規格:

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一、項目介紹

  報告基因 (reporter gene)是一種編碼可被檢測的蛋白質或酶的基因,也就是說,是一個其表達產物非常容易被鑒定的基因。把它的編碼序列和基因表達調節序列相融合形成嵌合基因,或與其它目的基因相融合,在調控序列控制下進行表達,從而利用它的表達產物來標定目的基因的表達調控。

  本實驗采用螢火蟲螢光素酶(Firefly Luciferase)和海腎螢光素酶(Rellina Luciferase)組成雙螢光素酶報告基因實驗系統(Dual-Luciferase Reporter Assay)。通過加入特定的螢光素酶底物,螢光素酶與底物反應過程中會發出生物螢光,然后可以通過化學發光儀測定反應過程中釋放的生物螢光,從而比較不同組間基因表達的差異。

二、實驗應用

  1、miRNA與靶基因3’UTR的靶向關系;

  2、轉錄因子/啟動子活性研究。
 

三、實驗流程

  1、重組質粒構建: 制備含有待檢測基因-Luc/Rluc的重組質粒;

  2、細胞系選擇: 根據實驗需要選擇細胞株,通常選擇轉染效率較高的293T細胞;

  3、共轉染: 將帶有Luc/Rluc標記的報告基因和目的基因進行共轉染,可設置不同的檢測時間點檢測;

  4、外界干預: 轉染后,可選擇性進行物理/化學/病毒等的相應刺激;

  5、細胞處理: 采用進口雙螢光素酶檢測試劑盒依照protocol操作;

  6、螢光檢測: 使用bio-teck 酶標儀進行螢光強度檢測;

  7、數據整理,結果分析。
 

四、客戶提供信息

  1.預測的啟動子或miRNA序列信息及結合位點;

  2.靶基因信息;

  3.載體選擇;

  4.實驗分組等細節;

  5.其他實驗需求。
 

五、公司可供選擇的載體
 

載體名稱 載體大小 標簽 原核抗性 應用
pGL3-Basic 4818bp Firefily Luciferase amp 雙螢光素酶實驗
pRL-SV40 3705bp Ranilla Luciferase amp 雙螢光素酶實驗
pGL3-promoter 5010bp Firefily Luciferase amp 雙螢光素酶實驗
psicheck 2.0 6273bp Firefily+Ranilla Luciferase amp 雙螢光素酶實驗

 

六、樣本保存運輸

  1、活細胞:一定要不透氣方瓶寄,常溫;

  2、凍存細胞:純干冰件,保證干冰充足;

  3、質粒、miRNA等-20℃寄送。
 

七、交付結果

  實驗報告,原始結果,分析結果。
 

八、實驗周期

  收到樣品后4-6周。
 

九、結果展示

Fig. Dual-luciferase Reporter Assay
 

試劑盒展示:

  左圖:試劑盒外觀照;右圖:試劑盒反應圖示
 

酶標儀展示:
 

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